ZR-75-1人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)步驟

ZR-75-1人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3、凍存液：90%wan全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。 

二、細(xì)胞處理：

1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 

2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 

收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿wan全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的 辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶,消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無(wú)菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的wan全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的wan全培養(yǎng)基,以便進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細(xì)胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。