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      當前位置:首頁產品中心科研細胞細胞系OKT 3 (小鼠雜交瘤細胞(抗CD3))
      OKT 3 (小鼠雜交瘤細胞(抗CD3))

      產品簡介

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      產品廠地:上海市
      更新時間:2025-02-17
      廠商性質:經銷商
      訪問量:327
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      品牌其他品牌貨號GOY-01X0529
      規格1×10?cells/T25培養瓶供貨周期現貨
      主要用途產品僅供科研使用應用領域化工

      冷凍保存細胞之方法?

      冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

      冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

      QQ截圖20210907103850.png

      產品屬性:  

      產品名稱

      規格

      貨號

       OKT 3 (小鼠雜交瘤細胞(抗CD3))

      1×10?cells/T25培養瓶

      GOY-01X0529

      商品介紹:

      名稱    OKT 3 (小鼠雜交瘤細胞(CD3))   

      別稱OKT3

      種屬小鼠(B細胞),小鼠(骨髓瘤細胞)

      年齡(性別)不詳

      組織來源脾臟

      生長特性懸浮細胞

      細胞形態淋巴母細胞樣

      背景描述OKT 3細胞是一株用人外周血淋巴細胞免疫小鼠,然后取免疫小鼠的脾細胞與P3X63Ag8.U1骨髓瘤細胞融合而建株的細胞系。

      生物安全等級1

      生長培養基IMDM20% FBS1% P/S

      推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL

      推薦換液頻率2~3/

      凍存條件

      凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

      溫度:液氮

      培養條件

      氣相:空氣,95%CO25%

      溫度:37℃

      注意事項該細胞為懸浮細胞,請注意離心收集細胞懸液;請勿直接倒掉細胞培養液。

       

      實驗要點及說明:

      1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;

      2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;

      3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

      4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;

      5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

      實驗報告:

      一、分離與培養:

      1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;

      2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

      3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

      4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

      5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

      二、免疫熒光鑒定:

      1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

      2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

      3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

      4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

      5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

      6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

       PCDHA10 基因全長ORF克隆

       HS6ST2 基因全長ORF克隆

       CAPN2 基因全長ORF克隆

       GCDH 基因全長ORF克隆

       EEF1G 基因全長ORF克隆

       PLIN3 基因全長ORF克隆

       SDPR 基因全長ORF克隆

       SOX7 基因全長ORF克隆

       CTSW 基因全長ORF克隆

       M6PR 基因全長ORF克隆

      OKT 3 (小鼠雜交瘤細胞(抗CD3))PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液(2015藥典) Buffered Sodium Chloride – Peptone Solution 250g

      20次 包涵體微量純化試劑盒 Inclusion Body Miniprep Kit 4℃保存(和核酸清除劑需要-20℃保存,包涵體溶解液室溫保存)

      2 ug pSUOER-retro-neo pSUOER-retro-neo 低溫運輸,-20℃保存

      50次 TRIzol伴侶 TRIzol-Mate 常溫

      2 ug pCMV-Tag 2B pCMV-Tag 2B 低溫運輸,-20℃保存

      動力-硝酸鹽培養基(A法) Power - nitrate medium 250g

      500g 亞鐵化鉀 ( 三水合 ) Potassium Ferrocyanide Trihydrate 室溫密封干燥保存

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