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      小鼠視網膜Muller細胞

      產品簡介

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      定量檢測試劑盒
      組織3-羥-3-甲戊二酰輔

      產品廠地:上海市
      更新時間:2025-02-18
      廠商性質:經銷商
      訪問量:513
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      品牌其他品牌貨號GOY-01X1057
      規格5×10?Cells/T25培養瓶供貨周期現貨
      主要用途產品僅供科研使用應用領域化工

      實驗要點及說明:

      1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;

      2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;

      3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

      4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;

      5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

      產品屬性:  

      產品名稱

      規格

      貨號

      小鼠視網膜Muller細胞

      5×10?Cells/T25培養瓶

      GOY-01X1057

      商品介紹:

      名稱    小鼠視網膜Muller細胞  

      2.組織來源:視網膜組織

      3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶

      4.細胞簡介:

      小鼠視網膜Muller細胞分離自視網膜組織;視網膜居于眼球壁的內層,是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成,兩層間在病理情況下可分開,稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連,由色素上皮細胞組成,它們具有支持和營養光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網膜分為10層,由外向內分別為:色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜,有感光作用;后部鼻側有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。第一神經元是視細胞層,專司感光,它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上,而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節細胞,約有10到數百個視細胞通過雙節細胞與一個神經節細胞相聯系,負責聯絡作用。第三層叫節細胞層,專管傳導。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構,它貼于眼球的后壁部,傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面,經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區,其分辨能力*。視網膜Muller細胞作為視網膜中的主要膠質細胞,大約占視網膜膠質細胞的90%,因而在視網膜疾病中起著何種作用也受到越來越多的關注。在超微結構水平上,Muller細胞的胞質似乎比臨近的其他細胞更高的電子密度,更發達的內質網,細胞核是典型的卵圓形或多角形。但在不同物種中或同一物種中的不同部位,Muller細胞形態也會有所差異的。視網膜Muller細胞是一種特化的神經膠質細胞,不僅具有維持視網膜的正常結構和功能的作用,并調制視網膜神經元活動,還能參與多種病理過程,尤其是眼底增殖性病變,如增生性玻璃體視網膜病變、增生性糖尿病視網膜病變等,體外培養Muller細胞是研究這些增殖性病變途徑之一。

      5.方法簡介:

      實驗室分離的小鼠視網膜Muller細胞采用膠原酶消化法和胰蛋白酶反復消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

      6.質量檢測:

      實驗室分離的小鼠視網膜Muller細胞經GFAP免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

      7.培養信息:

      培養基含FBS、生長添加劑、PenicillinStreptomycin

      產品貨號CM-M117

      換液頻率每2-3天換液一次

      生長特性貼壁

      細胞形態梭形、多角形

      傳代特性可傳3代左右

      消化液0.25%胰蛋白酶

      培養條件氣相:空氣,95%CO25%

      冷凍保存細胞之方法?

      冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

      冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

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      實驗報告:

      一、分離與培養:

      1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;

      2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

      3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

      4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

      5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

      二、免疫熒光鑒定:

      1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

      2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

      3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

      4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

      5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

      6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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