產(chǎn)品簡介

沃氏葡萄球菌PCR檢測試劑盒品牌是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。

沃氏葡萄球菌PCR檢測試劑盒品牌使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

樣本采集、存放及運輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品：
沃氏葡萄球菌PCR檢測試劑盒品牌15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說明書                                   1份

NEC(人食管細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit/Nc-細(xì)胞核-漿蛋白抽提試劑盒50次國產(chǎn)gersion

D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

MCF-7 [MCF7], 人腺細(xì)胞系

L1210(小鼠白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Hep B1.2(人肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

豬腎細(xì)胞英文名稱：PK（15）

CHO/中華倉鼠卵巢細(xì)胞株國產(chǎn)

小鼠結(jié)腸細(xì)胞英文名稱：CT-26 WT

7.5% NaHCO3溶液規(guī)格：100ml

人子宮內(nèi)膜細(xì)胞英文名稱：Ishikawa

沃氏葡萄球菌PCR檢測試劑盒品牌Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG 0.1ml

Tuberin/TSC2  馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 0.2ml

Phospho-Rb (Thr821)  磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml

Eukaryotic aspartyl protease  天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體 1ml

KMT3B/NSD1/ARA267  組蛋白甲基化KMT3B抗體（雄激素受體激活蛋白） 0.2ml

Gentamicin  慶大霉素抗體 0.2ml

CASC3/MLN51  腫瘤易感候選基因3抗體 0.1ml

ATM  毛細(xì)血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗體 0.1ml

WT-1/Wilms Tumor Protein  腎母細(xì)胞瘤蛋白抗體 0.1ml

E-cadherin/CD324  上皮鈣粘附分子抗體 0.1ml

PNMT  苯甲基轉(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml

MMP-16  基質(zhì)金屬蛋白酶-16抗體 0.1ml

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。