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      大鼠腸微血管內皮細胞

      產品簡介

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      產品廠地:上海市
      更新時間:2025-02-27
      廠商性質:經銷商
      訪問量:344
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      品牌其他品牌貨號GOY-01X0867
      規格5×10?Cells/T25培養瓶供貨周期現貨
      主要用途產品僅供科研使用應用領域化工

      產品屬性: 

      產品名稱

      規格

      貨號

      大鼠腸微血管內皮細胞

      5×10?Cells/T25培養瓶

      GOY-01X0867

      商品介紹:

      名稱    大鼠腸微血管內皮細胞 

      2.組織來源:腸組織

      3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶

      4.細胞簡介:

      大鼠腸微血管內皮細胞分離自腸道組織;腸道指的是從胃幽門至的消化管。腸是消化管中最長的一段,也是功能最重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產物的吸收都是在小腸內進行的,大腸主要濃縮食物殘渣,形成糞便,再通過直腸經排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物,以提供足夠的養分,其實它的功能還遠不止此——它還是機體內最大的微生態系統。微血管是極細微的血管,管徑平均為6-9μm,連于動、靜脈之間,互相連接成網狀。微血管壁薄,管徑較小,血流很慢,通透性大。其功能是利于血液與組織之間進行物質交換。其管壁主要由一層內皮細胞構成,在內皮外面有一薄層結締組織。另外還常可見到一種扁而有突起的細胞貼在微血管的管壁外面,稱為周細胞。

      5.方法簡介:

      實驗室分離的大鼠腸微血管內皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

      6.質量檢測:

      實驗室分離的大鼠腸微血管內皮細胞CD31免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

      7.培養信息:

      包被條件PLL0.1mg/ml),明膠(0.1%

      培養基含FBS、生長添加劑、PenicillinStreptomycin

      產品貨號CM-R047

      換液頻率每2-3天換液一次

      生長特性貼壁

      細胞形態內皮細胞樣

      傳代特性可傳2-3

      消化液0.25%胰蛋白酶

      培養條件氣相:空氣,95%CO25%

      冷凍保存細胞之方法?

      冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

      冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

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      實驗要點及說明:

      1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;

      2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;

      3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;

      4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;

      5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

      實驗報告:

      一、分離與培養:

      1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;

      2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

      3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

      4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

      5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

      二、免疫熒光鑒定:

      1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

      2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

      3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

      4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

      5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

      6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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